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El capítulo estreno contó con ocho personajes principales. Los dos protagonistas principales de la serie son Lincoln Burrows, interpretado por Dominic Purcell, condenado a la pena de muerte por un crimen que no cometió, y su hermano Michael Scofield, interpretado por Wentworth Miller, quien elabora un plan para salvarlo, tatuándose por su torso los planos cifrados de la cárcel de Fox River que él mismo diseño en su profesión de ingeniero. El proceso de casting para el personaje de Michael Scofield, comenzó varias semanas antes de la producción. Según Scheuring, la mayor parte de los que optaron para este papel "tenían un juego misterioso, pero falso". A una semana antes de la producción de la serie Wentworth Miller se presentó para este papel y Scheuring impresionado por su actuación, lo eligió al día siguiente.[8]Dominic Purcell fue elegido para el papel de Lincoln Burrows tres días antes de la producción de la serie, y fue el último en completar el casting final de actores. Purcell ya había trabajado anteriormente para la cadena FOX con su personaje protagónico en la serie John Doe. Unos días antes le habían enviado a éste un script del capítulo piloto de Prison Break. Al principio, Scheuring no estaba totalmente convencido, ya que pensaba que Purcell era "un muchacho muy bonito" para este papel. Sin embargo, Purcell ganó el papel y el primer día de filmación acudió al set de grabación con la cabeza afeitada, lo que sorprendió a Sheuring por la semejanza física de los dos protagonistas de la serie.[9]Sarah Wayne Callies fue la primera actriz que se presentó, y lo hizo para el papel de Sara Tancredi y fue también la primera en ser elegida como miembro del elenco principal de la serie. Sara Tancredi es la doctora de la prisión, que progresivamente se va enamorando de Michael Scofield. A la audiencia le gustó tanto este personaje que cuando comenzaron a correr rumores de que ya supuestamente no estaría en el programa para la tercera temporada, los fanáticos crearon una petición formal en línea exhortandole a quedarse.